維生素 A(retinol)、維生素 D(vitamin D2 和 vitamin D3)、維生素E(tocopherol)是機(jī)體維持正常代謝和機(jī)能的所必需的脂溶性維生素。其中維生素 E 有 8 種異構(gòu)體形式,即4 種生育酚(α、β、γ、δ-tocopherols)和 4 種三烯生育酚(α、β、γ、δ-tocotrienols),均具有重要的生物活性,被認(rèn)為是一類(lèi)主要的抗氧化劑。通常α-生育酚被報(bào)道是活性高的一種維生素E 形式,因此很多文獻(xiàn)報(bào)道的分析方法僅測(cè)定了α-生育酚的含量。近研究表明,其他幾種異構(gòu)體形式也在人體中具有重要的作用,并且γ-生育酚具有抗癌作用。維生素E 異構(gòu)體結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和活性的差異,決定了建立一種準(zhǔn)確可靠的分析方法,來(lái)分離和測(cè)定食品基質(zhì)中各個(gè)異構(gòu)體含量,具有重要意義。如何進(jìn)行食品中維生素A、D、E的測(cè)定呢?
新版國(guó)標(biāo)GB5009.82-2016對(duì)維生素E的四種異構(gòu)體的分析提出了要求。而常規(guī)C18色譜柱很難將其實(shí)現(xiàn)基線(xiàn)分離。另外維生素 D 也是嬰幼兒配方食品中一種重要的營(yíng)養(yǎng)素,在用常規(guī)反相C18分析D2 和D3 異構(gòu)體的時(shí)候經(jīng)常遇到分離度差的問(wèn)題。
本文建立了同時(shí)測(cè)定食品中D和E含量的液相色譜法,可實(shí)現(xiàn)對(duì)維生素E的四種異構(gòu)體和D2和D3兩種異構(gòu)體的分析及準(zhǔn)確定量。
▼
樣品前處理
取維生素 D2、D3 和E 標(biāo)準(zhǔn)品適量,精密稱(chēng)定,至25 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,制成濃度分別為 1.0 mg/mL 維生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 維生素 E 儲(chǔ)備溶液。
分別精密量取維生素 D3 和 E 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量,至 10 mL 棕色量瓶中,配制成混合溶液,再分別精密加入等量的濃度為 10 μg/mL 的維生素 D2 的內(nèi)標(biāo)溶液,甲醇稀釋至刻度,分別得到濃度為:ɑ-VE:2.4μg/ml,ß-VE:2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.
儀器方法
四種維生素E異構(gòu)體分析的色譜條件:
方法一
色譜柱:Acclaim C30
4.6×250 mm,5 μm(貨號(hào):075718)
流動(dòng)相:甲醇-水
流速:0.8mL/min
檢測(cè)器:紫外,296nm
柱溫:20℃
進(jìn)樣量:10μL
儀器:Ultimate 3000
圖1 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)圖譜:Acclaim C30
方法二
色譜柱:Accucore PFP
3.0×150 mm,2.6 μm(貨號(hào):17426-153030)
或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(貨號(hào):25405-254630)
流動(dòng)相:甲醇-水
流速:0.6mL/min (Accucore PFP), 1ml/min(GOLD PFP)
檢測(cè)器:紫外,296nm
柱溫:20℃
進(jìn)樣量:10μL
儀器:Ultimate 3000
圖2 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)圖譜:Accucore PFP
圖3 四種維生素E的實(shí)驗(yàn)譜圖:GOLD PFP
兩種維生素D異構(gòu)體分析的色譜條件:
4.6×150 mm,3 μm(貨號(hào):31103-154630)
流動(dòng)相:乙腈:甲醇=60:40
流速:1mL/min
檢測(cè)器:紫外,264nm
柱溫:35℃
進(jìn)樣量:10μL
儀器:Ultimate 3000
圖4 兩種維生素D異構(gòu)體的實(shí)驗(yàn)圖譜
結(jié)論
采用賽默飛公司Acclaim C30,Accucore PFP,GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色譜柱可按照國(guó)標(biāo)GB 5009.82-2016條件對(duì)維生素ADE進(jìn)行分析,并對(duì)各化合物有較好的保留和分離。
鄭州鴻朗科技有限公司 版權(quán)所有 主營(yíng)產(chǎn)品:資生堂色譜柱,樣品瓶和蓋墊,Thermo色譜柱
技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 ICP備案號(hào):豫ICP備18012731號(hào)-1 GoogleSitemap